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當(dāng)前位置：北京百奧創(chuàng)新科技有限公司>>產(chǎn)品>>試劑>> PRIME-P100-1G聚乙烯亞胺PEI轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品名稱：聚乙烯亞胺PEI轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
聚乙烯亞胺PEI轉(zhuǎn)染試劑（PEI Prime Powder, Transfection Grade Linear Polyethylenimine）：PEI Prime是以一種陽(yáng)離子高分子聚合物-聚乙烯亞胺(polyethylenimine，PEI)為載體的基因轉(zhuǎn)染試劑。PEI是在pH中性溶液中具有*正電荷密度的合成聚合物。帶正電的PEI與帶負(fù)電的DNA牢固結(jié)合，并賦予凈陽(yáng)離子電荷，使DNA進(jìn)入細(xì)胞。PEI Prime是一種高性能轉(zhuǎn)染試劑，利用PEI的特性旨在實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量，可重復(fù)性和可擴(kuò)展的瞬時(shí)基因表達(dá)。
應(yīng)用范圍：
PEI轉(zhuǎn)染試劑能夠高效率轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞系，包括貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。此外，PEI是用于HEK293和CHO懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染的試劑。PEI轉(zhuǎn)染試劑是生產(chǎn)任何具有成本效益的生物制劑的合適選擇，包括重組蛋白，抗體和病毒。
PEI線性轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
1. 低毒，高效
2. 操作簡(jiǎn)單，高性價(jià)比
3. 可提供可靠、具有可重復(fù)性的轉(zhuǎn)染結(jié)果
4. 適用于快速、高通量轉(zhuǎn)染流程
轉(zhuǎn)染步驟:
-以HEK293貼壁細(xì)胞為例，步驟如下：
1. 細(xì)胞接種：細(xì)胞密度2-6 x106 cells/mL。
2. 質(zhì)粒的準(zhǔn)備：在5％最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中，每106個(gè)細(xì)胞稀釋1.0 ug pDNA。
3. PEI的準(zhǔn)備：在5％最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中，每106個(gè)細(xì)胞稀釋3.0 ug PEI Prime，混勻。
4. 通過(guò)快速，短暫渦旋或顛倒數(shù)次試管，將pDNA和PEI Prime溶液混合在一起。
5. 使pDNA和PEI的混合物在室溫下靜置10分鐘。
6. 一邊旋轉(zhuǎn)板，一邊將pDNA和PEI混合物逐漸滴加到細(xì)胞中。
7. 于37℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
轉(zhuǎn)染的優(yōu)化：
為達(dá)到高轉(zhuǎn)染效率和低細(xì)胞毒性的理想結(jié)果，可以進(jìn)行如下優(yōu)化：
參數(shù) | 范圍 |
PEI濃度 | 3.50-6.50mg/（L final culture） |
DNA濃度 | 0.75-1.5mg/（L final culture） |
PEI/DNA混勻時(shí)間 | 5.0-15.0minutes |
與市場(chǎng)同類(lèi)品牌的PEI轉(zhuǎn)染效率的對(duì)比：
使用PEI Prime（PEI:DNA濃度比3：1）或某國(guó)外品牌PEI，用CMV-SEAP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染20ml 含HEK293懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)物。 轉(zhuǎn)染后5天，使用磷酸酶報(bào)告染料和UV / Vis檢測(cè)SEAP表達(dá)水平。數(shù)據(jù)表示占某國(guó)外品牌PEI的SEAP表達(dá)水平的百分比。結(jié)果顯示我們的PEI Prime 的轉(zhuǎn)染效率比國(guó)外同類(lèi)廠家高出40%。
